2015主管药师考试辅导：乳糜微粒检查试剂

　　乳糜微粒检查试剂是主管药师考试所涉及的内容，环球网校医学考试网整理如下，供广大主管药师考试考生参考学习。

　　(1)免疫透射比浊法：

　　①样品稀释剂：pH 7.4的磷酸盐缓冲液(0.01mol/L磷酸盐中含0.15mol/L氯化钠)，内含PEG-6000 40g/L及表面活性剂适量(选用聚氧乙烯月桂醚类，如Thesit或Tween-20)，用GS玻芯漏斗抽滤后用。本试剂的吸光度A340nm<0.05，在2～6℃冰箱中可存放半年。如半年后A值仍<0.05，可继续应用，如>0.05可按上述条件抽滤后再用。

　　②羊或兔抗人apoAⅠ抗血清：原血清效价以1∶32～1∶64为宜。抗血清可用含PEG-6000的磷酸盐缓冲液(不含表面活性剂)或用硫酸铵沉淀法纯化。抗血清应用液浓度因各批抗血清的效价及免疫亲和力而异(应按试剂盒说明书，临用前稀释)。抗血清中含防腐剂，在2～6℃冰箱中可存放半年。原血清(冻干)在低温冰箱中(-20℃以下)可贮存数年。

　　③参考血清：现在已有国际标准，即WHO CM参考物质SPI-01(冻干血清)。符合国际标准的校准血清由卫生部北京老年医学研究所提供。

　　校准血清保存在-20℃以下，至少稳定半年，化冻后必须彻底混匀后才能应用。最好备有高、中、低浓度(例如apoAⅠ 2.0，1.3与0.6g/L左右)的校准血清各1份。便于作校准曲线。

　　附注：

　　①关于抗血清：比浊测定与其他方法相比对抗血清的要求更高。比浊法以用多克隆抗体为宜。抗血清中必须不含杂抗体。必须十分重视从人血清中提取的apoA-Ⅰ达到免疫纯、色谱纯与电泳纯，这不是一般实验室都能做到的。抗血清效价(滴度)不可低于16.目前国内某些商品试剂中，apoA-Ⅰ抗血清效价极低，选购试剂盒时必须注意。如果没有在选购前鉴定抗血清质量的经验，应请有条件的单位鉴定之。

　　②上法中标本(血清)稀释200倍是为了便于手工操作(加样100μl)，如有精密加样器，可作20倍稀释(用10μl)。为了适合不同实验室的条件(如不同类型的自动化仪器)，作适当修改时应注意抗原抗体的比例，必须十分注意反应体系中不可有抗原过量，线性上限不可低于2.5g/L.换言之，抗血清用量必须充裕，否则标本中apoA-Ⅰ高水平时测出结果偏低。目前国内某些商品试剂盒不但抗血清效价过低，操作中所定标本用量又过大(如3～5μl)，抗体明显不足，测出结果必然不准确。

　　③为了达到准确测定的目的，apoA-Ⅰ与B比浊测定(终点法)中必须作校准曲线计算结果。一定范围(低标本用量)浓度(X)与浊度(Y)基本上成直线关系，直线回归计算出在Y轴上有一定截距(A值<0.1)，所以用单点校准计算结果偏差较大，使测出结果不能准确反映浓度的高低(高的偏低，低的偏高)。千万不要因为单点法简便而忽略了测定的准确性。无论用何种自动化仪器，必须先试作校准曲线。如果在所用仪器及特定条件下反复测试，回归线的截距不明显时，才能采用单点校准法。标本用量在3～5μl时，即使加大抗血清用量，浓度与浊度也不成直线关系，只能用曲线直线化转换后计算。

　　④主要干扰因素是血清本身的混浊(如高脂血清)，用超离心或脂肪酶水解等标本预处理方法都不实用。用表面活性剂消浊的作用也有限，所以在测定中必须作标本空白管。除了自动分析中可采用两点法外，手工法用单一试剂而不扣除标本空白的做法是错误的。为了减少基质效应对浊度反应的影响，必须用定值血清作校准物。此外，尘埃粒子、比浊皿划痕等干扰也必须排除。

　　⑤有的商品试剂盒(包括某些进口产品)所附校准血清定值不准确，是误差的重要来源。

　　(2)火箭电泳法：

　　①巴比妥缓冲液，离子强度0.05，pH8.6.

　　②10g/L琼脂糖(标准电内渗)用巴比妥缓冲液配制，加热溶化，混合后，分装10ml/管，冷后4℃贮存。

　　③0.15mol/L NaCl溶液。

　　④兔(或羊)抗人apoAⅠ抗血清(效价不低于1∶16)及apoB抗血清(效价不低于1∶32)。

　　⑤校准血清(同比浊法)。

　　⑥染色液：考马斯亮蓝R-250 0.25g溶于甲醇45ml中，加入冰醋酸10ml及水45ml，混合，溶后备用。

　　⑦脱色液：每升含冰醋酸50ml及甘油100ml.