初级检验技士辅导：微生物学检查(2)

　　初级检验技士辅导：微生物学检查(2)

　　检验方法及鉴定：

　　1)直接镜检：无菌取脓汁、痰、渗出液和脑脊液(离心后取沉渣)涂片，经革兰染色后镜检。根据其形态、染色、初步诊断。

　　2)分离培养：血液标本注入50ml葡萄糖肉汤或含硫酸镁肉汤增菌培养，置35℃，24小时后开始观察有无细菌生长，若均匀混浊，溶血及胶胨状生长，则接种于血琼脂，进一步鉴定，若无细菌生长，于48-72小时后观察。血液标本也可注入血培养瓶培养。

　　脓汁、尿道渗出液、脑脊液离心沉淀物，可直接接种血琼脂。35℃18-24小时培养，可见直径2-3mm，产生不同色素的菌落。金黄色葡萄球菌在菌落周围有透明的溶血环。

　　常用普通营养琼脂平板、血琼脂平板和高盐甘露醇培养基，血培养用葡萄糖增菌培养基。

　　菌落特征、色素形成、形态染色、血浆凝固酶等，甘露醇发酵。

　　3)鉴定试验

　　①触酶试验：细菌产生的过氧化氢酶催化双氧水生成水和氧气，产生气泡。

　　方法：取营养琼脂上的菌落置于洁净试管内或洁净玻璃片上，滴加3%H2O2溶液数滴，观察结果，如立即有大量气泡产生为阳性，不产生或气泡量少为阴性。葡萄球菌属为触酶阳性。

　　②血浆凝固酶：血浆凝固酶是金黄色葡萄球菌所产生的一种与其致病性有关的侵袭性酶，分为结合型和游离型两种。其作用是使血浆中纤维蛋白在菌体表面沉积和凝固以阻碍吞噬细胞的吞噬。

　　结合型：位于细胞壁上，能直接作用于血浆中纤维蛋白原，使之转化为纤维蛋白，环绕菌体形成凝块。---玻片法检测

　　游离型：产生后分泌到胞外，不能直接作用于血浆中纤维蛋白原，但可激活血浆凝血酶原，使之转化为凝血酶，后者作用于纤维蛋白原转化为纤维蛋白，导致血浆凝固。---试管法检测。

　　③甘露醇发酵试验。

　　④新生霉素敏感试验：凝固酶阴性的葡萄球菌的鉴别，采用该方法。一般新生霉素耐药者多为腐生葡萄球菌，敏感者为表皮葡萄球菌。

　　⑤同时进行体外药物敏感试验：对苯唑西林的敏感试验是必须的，可将葡萄球菌分为苯唑西林敏感的葡萄球菌和苯唑西林耐药的葡萄球菌。同时有必要测定β-内酯胺酶及万古霉素的敏感性。

　　金黄色葡萄球菌：触酶试验阳性、血浆凝固酶试验阳性、甘露醇试验阳性、对新生霉素敏感。

　　表皮葡萄球菌：触酶试验阳性、血浆凝固酶试验阴性、对新生霉素敏感。

　　腐生葡萄球菌：触酶试验阳性、血浆凝固酶试验阴性、对新生霉素耐药。

　　4)耐药物性试验：检测耐甲氧西林的金葡菌，耐甲氧西林的表葡菌，耐万古霉素的金黄色葡萄球菌，耐万古霉素的表皮葡萄球菌。

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