初级检验技士辅导：微生物学检查方法

　　初级检验技士辅导：微生物学检查方法

　　微生物学检查方法与原理

　　1、标本采集：根据链球菌感染所致疾病不同，可采集浓汁、咽拭、痰、血、尿等标本。

　　2、检验方法及鉴定：

　　(1)直接镜检：革兰染色，如符合链球菌的形态特征可初报。

　　(2)直接检测抗原。

　　(3)分离培养：血液标本，以无菌操作取两份血液各8-10ml，分别注入肉汤培养基，分别置氧和厌氧环境中增菌，有细菌生长，再分别接种于两个血平板，置需氧和厌氧环境中培养。浓汁和咽拭标本接种血平板并涂片染色镜检，若形态酷似链球菌，并革兰阳性，可初报。上述的培养物经35℃18-24小时培养后，观察菌落特征和溶血情况。链球菌的菌落通常较小，透明或半透明，似针尖大小、凸起，菌落周围可出现α-溶血或β-溶血，也可不出现溶血。然后取可疑菌落经涂片、染色镜检证实。甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌可产生α-溶血，它们的菌落形态非常相似，应以区别。

　　(4)鉴定

　　1)胆汁七叶苷试验：因D链球菌能在40%胆汁培养基中生长，并可分解七叶苷，使培养基变黑。

　　2)Optochin敏感性试验：几乎所有的肺炎链球菌株都对Optochin敏感，而其他链球菌通常不被其所抑制。

　　3)马尿酸盐水解试验：B群链球菌具有马尿酸酶，使马尿酸水解。

　　4)CAMP试验：羊血平板上B群链球菌与金葡菌协同形成箭头状溶血。

　　5)杆菌肽酶敏感试验：化脓型链球菌为阳性。

　　6)血清分群分型。

　　7)猪链球菌检测：用API20Strep生化鉴定系统鉴定，血清学分群分型。采用PCR技术检测猪链球菌毒力基因MRP及EF，PCR检测编码谷氨酸脱氢酶的基因片断。

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