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初级检验技师考试辅导:荧光抗体技术

更新时间:2010-11-29 13:37:34 来源:|0 浏览0收藏0

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  初级检验技师考试辅导:荧光抗体技术

  荧光抗体技术

  (1)荧光抗体的制备和鉴定

  ①抗体荧光素标记:用于标记抗体,要求是高特异性和高亲和力的。作为标记的荧光素应符合以下要求:

  1)应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基团,与蛋白质结合后不易解离,而未结合的色素及其降解产物易于清除。2)荧光效率高,与蛋白质结合后,仍能保持较高的荧光效率。3)荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明。4)与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质。5)标记方法简单、安全无毒。6)与蛋白质的结合稳定,易于保存。常用的标记蛋白质的方法有搅拌法和透析法两种。

  ②荧光抗体的鉴定:包括效价及荧光素与蛋白质的结合比率。抗体效价可以用琼脂双扩散法进行滴定,效价大于1:16者较为理想。荧光素与蛋白质结合比率(F/P)来计算。F/P值越高,说明抗体分子上结合的荧光素越多,反之则越少。一般用于固定标本的荧光抗体以F/P=1.5为宜,用于活细胞染色的以F/P=2.4为宜。

  (2)免疫荧光显微技术:是使荧光抗体与标本切片中组织或细胞表面的抗原进行反应,洗涤除去游离的荧光抗体后,于荧光显微镜下观察,在黑暗背景上可见明亮的特异荧光。

  ①标本的制作:主要靠观察切片标本上荧光抗体的染色结果作为抗原的鉴定和定位。

  ②荧光抗体染色:滴加经适当稀释的荧光抗体进行染色。

  ③荧光显微镜检查:最好在染色当天即作镜检,以防荧光消退,影响结果。

  ④实验的类型:包括直接法、间接法、补体结合法和双标记法。

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