初级检验技师辅导：酶联免疫吸附试验

　　初级检验技师辅导：酶联免疫吸附试验

　　酶联免疫吸附试验

　　(1)基本原理

　　酶联免疫吸附实验(ELISA)属固相酶免疫测定方法，了解其原理：根据颜色深浅进行定性或定量分析。

　　(2)方法类型及反应原理

　　ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体;②酶标记的抗原或抗体;③酶作用的底物。

　　①双抗体夹心法：是检测抗原最常用的方法。也可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。

　　②双位点一步法：这种方法不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，测定的敏感性和特异性也显著提高。

　　③间接法测抗体：是检测抗体最常用的方法，其原理是利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体。本法只要更换不同的固相抗原，可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。

　　④竞争法：竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。

　　⑤捕获法测IgM抗体：血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗体多用捕获法，先将所有血清IgM(包括特异性IgM和非特异性IgM)固定在固相上，在去除IgG后再测定特异性IgM。

　　⑥应用亲和素和生物素的ELISA：亲和素是一种糖蛋白，可由蛋清中提取。生物素又称维生素H，存在于蛋黄中。亲和素与生物素结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大，两者一经结合极为稳定。

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