初级中药师辅导：黄酮类化合物的分离

　　初级中药师辅导：黄酮类化合物的分离

　　分离的基本依据：

　　极性差异、酸性强弱、分子大小和特殊结构。

　　1、溶剂萃取法

　　2、PH梯度法：用不同浓度的碱分离

　　3、柱色谱法

　　(1)硅胶柱色谱法

　　适于分离异黄酮，二氢黄酮(醇)和高度甲基化或乙酰化的黄酮及黄酮醇类。

　　分离苷元时：氯仿-甲醇混合溶剂洗脱。

　　分离苷时：氯仿-甲醇-水或乙酸乙酯-丙酮-水

　　(2)聚酰胺柱色谱

　　适于黄酮类化合物的分离。

　　原理：氢键吸附学说，即聚酰胺的吸附作用是通过其酰胺羰基与黄酮类化合物上的酚羟基形成氢键缔合而产生的，其吸附强度取决于黄酮类化合物分子中酚羟基的数目与位置等及溶剂于黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键?合能力的大小。

　　规律：

　　A：与酚羟基的数目有关，数目越多，吸附力越强。如：桑色素的吸附力强于山奈酚

　　B：与酚羟基的位置有关，如果酚羟基所处的位置易形成分子内氢键，则吸附力减弱。如：大豆素的吸附力强于卡来可新

　　C：分子内芳香化程度越高，共轭双键越多，则吸附力越强。查耳酮吸附力强于二氢黄酮

　　D：不同类型黄酮类化合物，被吸附的强弱顺序为：黄酮醇>黄酮>二氢黄酮醇>异黄酮。

　　E、苷元相同时，以含水移动相洗脱，被吸附的强弱顺序为： 苷元>单糖苷>双糖苷>?糖苷。如果以有机溶剂作洗脱剂，结果则相反。

　　F：洗脱溶剂的影响：洗脱能力由弱到强的顺序为：

　　水-甲醇或乙醇(浓度由低到高)-丙酮-稀氢氧化钠水溶液或氨水-甲酰胺-二甲基甲酰胺-尿素水溶液

　　(3)葡聚糖凝胶色谱法

　　凝胶类型：Ssephadex LH-20和Sephadex G两种类型的凝胶。

　　分离苷元时：利用吸附作用，游离酚羟基数目越多，则吸附力越强，越难洗脱。

　　分离苷时：主要靠分子筛，洗脱时按苷分子量由大到小的顺序依次被洗脱出柱体。

　　常用的洗脱剂：碱性水溶液，含盐水溶液、醇及含水醇

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