初级检验技士辅导:霍乱弧菌的检验方法
初级检验技士辅导:霍乱弧菌的检验方法 $lesson$
检验方法及鉴定
1)直接镜检:
动力观察:采取病人“米泔水样”大便或呕吐物制成悬滴片,观察细菌动力,可见流星或穿梭状动力的细菌。
制动试验:取病人“米泔水样”大便标本或6小时蛋白胨水增菌液中发现运动活泼的弧菌,可再做一张涂片,加一滴不含防腐剂的霍乱多价诊断血清(效价1:64),用暗视野镜观察,3分钟内最初活泼的弧菌被凝集,运动被抑制,即为阳性,则可鉴定。
涂片染色:取标本涂片2张,干燥后用乙醇固定,分别用革兰染色及1:10稀释复红染色,镜检有无革兰氏阴性,并成鱼群状排列的弧菌。
2)细菌分离培养
①直接分离培养:急性期患者米泔水样粪便标本,除增菌外可同时将标本分离培养,常可获得阳性结果。分离用的培养基有强、弱2种选择培养基。弱选择培养基如碱性琼脂和碱性胆盐琼脂,抑制能力弱,粪便中某些杂菌仍可生长。强选择性培养基常用的有庆大霉素琼脂等。现多采用碱性蛋白胨水增菌,再用强选择培养基进行分离。
②增菌后分离培养:来自带菌者或恢复期患者的标本,因含菌量少必须先增菌后分离。可将标本接种于碱性蛋白胨水内,置35℃增菌6-8小时后分离培养,必要时可做二次增菌后再进行分离培养。
3)鉴定:
根据霍乱弧菌在各种选择培养基上的特点,挑选可疑菌落进行鉴定。鉴定以血清学(玻片凝集)为主,结合形态学、生化反应作出判断。必要时作其他试验以便与其他细菌进行鉴别。
①玻片凝集试验:从分离培养基上挑取可疑菌落于霍乱弧菌多价诊断血清(效价1:32-1:64)作玻片凝集试验。立即出现凝集者为阳性,同时设生理盐水和阳性细菌株对照。
②形态学检查:取纯培养物涂片革兰氏染色,观察菌体形态及染色性。用悬滴法或半固体穿刺法检测动力。
③生化反应:霍乱弧菌氧化酶试验、吲哚试验、粘丝试验和霍乱红试验均阳性。
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