初级检验技师辅导：粪便化学法隐血试验
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初级检验技师辅导：粪便化学法隐血试验 $lesson$
化学检查
一 、隐血试验
隐血是指消化道出血量很少，肉眼不见血色，而且少量红细胞又被消化分解放致显微镜下也无从发现的出血状况而言。
[方法学评价] 隐血试验(occult blood test,OBT)
1、 目前主要采用化学法
如邻联甲苯胺法、还原酚酞法、联苯胺法、匹拉米洞法,无色孔雀绿法、愈创木酯法等。
实验设计原理 基本于血红蛋白中的含铁血红素部分有催化过氧化物分解的作用，能催化试剂中的过氧化氢，分解释放新生态氧，氧化上述色原物质而呈色。呈色的深浅反映了血红蛋白多少，亦即出血量的大小。
灵敏度 以上试验方法虽然原理相同，但在实际应用中却由于粪便的成分差别很大，各实验室具体操作细节如粪便取材多少，试剂配方、观察时间等不同，而使结果存在较大差异。
多数文献应用稀释度的血红蛋白液对这些方法灵敏度的研究表明，邻甲苯胺法、还原酚酞法最灵敏，可检测出0.2-1mg/L的血红蛋白，只要消化道有1-5ml的出血就可检出。
还原酚酞法由于试剂极不稳定，放置可自发氧化变红而被摒弃。
高度灵敏的邻联甲苯胺法常容易出现假阳性结果，中度灵敏的试验包括联苯胺法、无色孔雀绿法，可检出1-5mg/L的血红蛋白，消化道有5-10ml出血即为阳性。
联苯胺法由于有致癌作用而无色孔雀绿法在未加入异喹啉时灵敏度差，需(6-10mg/L血红蛋白，)试剂配制和来源均不如匹拉米洞方法方便。愈创木酯法灵敏度低，需6-10 mg /L血红蛋白才能检出，此时消化道出血可达20ml。但假阳性很少，如此法为阳性，基本可确诊消化道出血。
目前国内外生产应用四甲基联苯胺和愈创木酯为显色基质的隐血试带，使隐血试验更为方便，但未根本解决隐血试验方法学中的问题。
以上各种隐血试验化学法虽简单易行，但均基于血红蛋白中的血红素可促使双氧水分解释放新生态氧，使色原物质氧化这一原理，方法上缺乏特异准确性。此外化学试剂不稳定，久置后可使反应减弱。外源性动物仪器如含有血红蛋白，肌红蛋白、其血红素的作用均可使试验呈阳性，大量生食蔬菜中含有活性的植物过氧化物酶也可催化双氧水分解，出现假阳性反应，所以除愈创木酯法外均要求素食3天，为此有人提出将粪便用水作1：3稀释加热煮沸再加冰乙酸和乙醚提取血红蛋白测定可排除干扰。此法虽然可靠，但不适用于常规工作。加上血液如在肠道停留过久，血红蛋白被细菌降解，血红素不复存在，则会出现与病情不符的阴性结果，病人服用大量维生素C或其它具有还原作用的药物，此实验中可使过氧化物还原，不能再氧化色原物质，亦可使隐血试验呈假阴性。除上述干扰隐血试验，亦可由于检验人员取材部位不同，标本反应时间不同，检验员对显色判断不同，故在不同一方法的试验中，还可产生误差等，致使目前国内外尚无统一公认的推荐的方法，更谈不到实验的标准化。