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临床医学检验复习资料:酶免疫技术的特点

更新时间:2013-02-25 14:19:49 来源:|0 浏览0收藏0

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摘要 临床医学检验复习资料:酶免疫技术的特点

  临床医学检验复习资料:酶免疫技术的特点

  酶免疫技术是利用酶催化底物反应的生物放大作用,提高特异性抗原-抗体免疫学反应检测敏感性的一种标记免疫技术。

  (1)酶和酶作用的底物:

  ①辣根过氧化酶(HRP):是一种糖蛋白,含糖量约18%;分子量为44kD;是一种复合酶,由主酶(酶蛋白)和辅基(亚铁血红素)结合而成的一种卟啉蛋白质。主酶为无色糖蛋白,在275nm波长处有最高吸收峰;辅基是深棕色的含铁卟啉环,在403nm波长处有最高吸收峰。在反应中H2O2是受氢体底物,DH2无色的供氢体底物,在HRP的催化下脱氢而显色,此即HRP作为示踪物的原理。

  ②碱性磷酸酶(AP):是从牛肠粘膜或大肠杆菌中提取。从大肠杆菌提取的最适pH为8.0;用小牛肠粘膜提取的AP最适pH为9.6。

  ③其他的酶:有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶和脲酶等。

  (2)酶标记的抗体或抗原:

  称为结合物。制备方法通常有戊二醛交联法(包括有一步法和二步法)和过碘酸盐氧化法。标记抗体的最佳用量:通常采用棋盘滴定法进行滴定。

  (3)固相载体:

  主要试剂:固相的抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体和与标记酶直接关联的酶反应底物。可作固相载体物质最常用的是聚苯乙烯。与聚苯乙烯类似的塑料为聚氯乙烯。聚苯乙烯作为ELISA固相载体,载体还包括微孔滤膜和含铁磁性微粒。聚氯乙烯板的特点为质软板薄,可切割,价廉、但光洁度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值有时也略高。

  (4)免疫吸附剂:

  固相的抗原或抗体称为免疫吸附剂。将抗原或抗体固相化的过程称为包被。如在包被后再用1%~5%牛血清白蛋白包被一次,可以消除这种干扰。这一过程称为封闭。包被好的ELISA板在低温可放置一段时间而不失去其免疫活性。

 

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