初级中药士辅导：中成药分离与精制(4)

　　初级中药士辅导：中成药分离与精制(4) $lesson$

　　色谱分离法

　　1、吸附色谱法

　　原理：利用同一吸附剂对混合物中各种成分吸附能力的差异，而使各成分达到分离目的的色谱方法。吸附剂、溶质及溶剂为固液吸附的三要素。此法特别适用于脂溶性中等分子量成分的分离。

　　常用吸附剂：硅胶、氧化铝

　　2、凝胶过滤色谱法(排组色谱、分子筛色谱)

　　常用的有葡聚糖凝胶(sephadex G),聚丙烯酰胺凝胶(Bio-GelP)，及羟丙基葡聚糖凝胶(Sepharese LH-20)等。主要用于分子量1000以下的化合物的分离。葡聚糖凝胶只适于在水中应用。羟丙基葡聚糖凝胶适于在不同类型的有机溶剂中应用。

　　分离原理

　　葡聚糖凝胶吸水后，形成凝胶粒子，在交链键的骨架中存在着许多网眼，网眼大可使大分子量的化合物进入，网眼小则只能使小分子量的化合物进入。超过一定限度的大分子物质，就被排阻在凝胶颗粒的外部难以进入网眼内部，则大分子物质首先被洗出。

　　3、离子交换色谱法

　　适于具有酸、碱或两性的化合物，可离子化物质的分离。如：氨基酸、生物碱、有机酸和酚类。

　　离子交换色谱取决于化合物解离度的大小，带电荷的多少。解离度小的化合物先被洗脱。离子交换剂有离子交换树脂、离子交换纤维素和离子交换凝胶三种。

　　4、大孔吸附树脂法

　　原理

　　即具有吸附性，又具有筛选性分离的特点。吸附性是由于范德华引力或氢键吸附的结果;筛选性则由多孔性网状结构引起的。一般来说，大孔树脂的色谱行为具有反相的性质。被分离物质的极性越大，其Rf值越大。对洗脱剂而言，极性越大的溶剂，洗脱能力越弱。大孔吸附树脂在水中的吸附性强。

　　洗脱液的选择

　　常用甲醇，乙醇，丙酮，乙酸乙酯等。

　　先用适量水洗下蛋白质、鞣质、低聚糖、多糖等极性物质。再用低到高浓度的醇依次洗脱，一般70%乙醇洗脱皂苷;3%～5%碱液洗下黄酮、有机酸、酚类和氨基酸。10%酸洗下生物碱、氨基酸。丙酮洗下中性亲脂性成分。

　　优点：吸附容量大，选择性好，成本低，收率较高，吸附速度快，再生容易等优点。

　　5、分配色谱

　　正相色谱：固定相的极性大于流动相;分离水溶性和极性较大的化合物

　　反相色谱：固定相的极性小于流动相;分离脂溶性化合物

　　常用的反相键合柱亲脂性：RP-18>RP-8>RP-2 常用流动相 甲醇-水或乙腈-水。

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