2010年生物化学复习要点：疟原虫培养

更新时间：2010-07-13 14:52:25 来源：|0

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　　疟原虫培养可以分红细胞内期和红细胞外期。红细胞内期培养中四种人体疟原虫仅恶性疟原虫可以成功地在体外长期培养。

　　疟原虫培养比较复杂，需要“O”型人红细胞、人血清及由3%氧气、4%二氧化碳和93%氮气组成的气体充在培养瓶内。当然还需要基本的培养液例如RPMI1640等，而且必须每天更换。整个培养系统也必须是无菌状态的。这里例举一种培养方法：取新鲜“O”型抗凝全血，离心使血清与红细胞分离开来。转自环球网校edu24ol.com

　　血清按一次需要量分装于小容量的无菌瓶或试管中，-20℃保存。红细胞以RPMI1640洗涤三次后，悬浮在等量的含10%人血清的RPMI1640中，4℃保存，可使用2～3周。市售的RPMI1640液体培养液或粉末培养基溶解过滤灭菌后，加入HEPES和谷胱苷肽，使最终浓度分别为25mmol和0.6%，成为完全的RPMI1640的培养液。

　　培养时取病人血，以RPMI1640洗涤2次，再加入含15%人血清的完全RPMI1640培养液，使再成为含量约为0.2%～0.4%的悬液。取悬液8ml置35cm2(70ml)无菌细胞培养瓶中，再加入红细胞悬液，使其最终成为3%～5%红细胞悬液，充入上述混合气体，紧盖瓶盖，37℃培养箱中培养。一般24小时更换培养液一次。换液时尽量不晃动细胞层，不触及红细胞，以消毒吸管除去老培养液。加入等量新鲜的含15%人血清的完全RPMI1640培养液后再轻轻悬浮细胞，37℃继续培养。同时定时吸取少量沉淀细胞涂成簿血片，姬氏染色，了解虫体生长情况。红细胞外期的培养恶性疟原虫和间日疟原虫可以成功。