2014年临床助理医师医学微生物学复习资料：病毒感染的检查方法

　　2014年临床助理医师医学微生物学复习资料之病毒感染的检查方法，环球网校医学考试网搜集整理相关知识供广大考生参考，希望对大家备考有所帮助。

　　一、标本的采集与送检(principle of collection specimen)

　　1、采集急性期标本

　　2 、污染标本应用抗生素抑制标本中细菌或真菌的生长

　　3 、低温保存，快速送检

　　4、 血清学实验检查抗体(双分血清)

　　二、病毒的分离培养与鉴定

　　(一)病毒的分离培养

　　• 动物接种 选择易感动物及接种部位，观察发病情况

　　• 鸡胚培养 不同病毒选择不同接种部位(绒毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊)，分离流感病毒最常用。

　　• 细胞培养：分离病毒最常用的方法

　　(1)原代细胞―来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传2-3代。

　　(2)二倍体细胞―在体外分裂50-100代后仍保持2倍体染色体数目的单层细胞。

　　(3)传代细胞―能在体外无限传代的细胞多由癌细胞或二倍体细胞突变而来。

　　病毒在培养细胞中增殖的指标：

　　• 细胞病变效应(CPE)：即某些病毒在细胞内增殖引起的特有的细胞病变(细胞变圆、聚集、坏死、脱落等)

　　• 红细胞吸附

　　• 干扰现象

　　• 细胞代谢改变(pH)

　　(二)病毒的鉴定

　　核酸类型、理化性状、形态、血清学鉴定、基因测序和生物对比。

　　(三)病毒的数量与感染性测定

　　1.50%组织细胞感染量

　　2.红细胞凝集试验

　　3.空斑形成试验

　　三、病毒的血清学诊断

　　用已知病毒抗原检测病人血清中相应抗体以诊断病毒性疾病(中和实验、补体结合实验、血凝抑制实验、凝胶免疫扩散等)。

　　四、病毒的快速诊断

　　(一) 形态学

　　电镜和免疫电镜――直接观察病毒

　　光镜―― 大病毒 和包涵体

　　(二)检测病毒蛋白抗原

　　用已知特异性抗体直接检测病毒蛋白抗原(简便、敏感、特异)

　　常用方法：免疫荧光技术(IF)

　　固相放射免疫测定(SPRIT)

　　酶免疫技术(EIA)等。

　　(三) 检测病毒特异性IgM抗体

　　检测病毒特异性IgM抗体可诊断急性感染或证明病毒复制。

　　(四)检测病毒的核酸

　　1 核酸杂交

　　? 斑点杂交(dot hybridization)

　　? 原位杂交(in site hybridization)

　　? DNA印迹杂交(Southern blot)

　　? RNA印迹杂交 (northern blot)

　　2 核酸扩增

　　? 聚合酶链反应 (polymerase chain reaction，PCR DNA)

　　? 连接酶链反应(ligase chain reaction，LCR)

　　? 反转录PCR(Reverse transcrptase PCR，RT―PCR (RNA)

　　3 基因芯片技术(gene chip)

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